学术文章

凝血纠正试验——小试验大作用

什么是凝血纠正试验?

纠正试验(也称混合试验或mixing study)是通过将患者的血浆与正常人的混合血浆按照比例混合后,重新检测相关检测项目,主要用于筛查凝血因子缺乏或抑制物存在。常规的APTT检测结果只反应了体内50%的内源性凝血因子的活性,也就是说只有体内凝血因子降低>50%(不同试剂的敏感性和特异性差异较大,部分试剂可检测出低于正常水平15%~30%血浆凝血因子异常)时,其检测时间才延长(此时临床上出血风险增高)。患者血浆在加入混合正常人血浆100%的凝血因子,使混合后血浆中含有≥50%的凝血因子,可使检测结果纠正至正常或明显缩短。[1]

什么时候需要启动纠正试验?

目前没有统一的共识,这也是临床医生较少开展APTT纠正试验的原因之一。当前的教材建议APTT结果延长,且无明确影响结果延长的因素时,应启动纠正试验。其中将APTT时间超过正常对照10秒、PT、TT超过3秒定义为延长[1]

怎么做纠正试验?

下面以APTT纠正试验作介绍:

  1. 取APTT延长(APTT时间超过正常对照10秒)作为患者血浆
  2. 将患者血浆(a)与正常混合血浆(c)进行1:1混合(各0.2ml)
  3. 正常混合血浆:取20份正常人血浆混合后离心取上清液备用。
  4. 将患者血浆(a)与正常混合血浆(c)进行1:1混合(各0.2ml)后孵育2h

分别检测以上4份标本的APTT时间

怎么判断结果?

1、目前主要的文献和临床实验室推荐使用Rosner指数,判断阈值为11

即:<11为纠正,>11为未纠正。Rosner指数=(b-c)*100/a [2]

举例说明

a 患者血浆时间

b混合血浆时间MIX c正常混合血浆normal Rosner指数
48 40.2 37.3 6.041667
65.3 42.5 37.3 7.963247
59.8 48 37.3 17.89298
68.5 52 37.3 21.45985
51.3 44.9 37.3 14.81481

–Rosner指数 < 11 纠正 (患者存在VIII、FIX、FXI、FXII、VWF内源性因子缺乏; 需排除使用肝素制剂)

–Rosner指数 > 11 未纠正 (患者存在FIX、FXI、FXII即刻型因子抑制物或者LA)

2、由于有VIII抑制物有时间和温度的依赖性[3], 正确的方法则是在37°C孵育2小时后观察结果孵育后的纠正时间--孵育前的纠正时间≥10秒证明有FVIII 抑制物。

 

注意事项

  1. 较弱的抑制物可使 APTT轻微延长并且混合纠正实验难以清楚判定。有报道支持Rosner指数在11-15的范围为判断的灰区,建议增加实验如TT检测辅助判断。[5]
  2. 具体水浴时间1小时还是2小时,也并未统一。全国临床检验操作规程和血友病诊断和治疗中国专家共识均推荐2h。[4]

 

 

 

 

 

 

参考文献:

[1] 熊立凡, 刘成玉. 临床检测基础(第四版) [J]. 人民卫生出版社, 2007,8):70-75..

[2] Kershaw G, Orellana D. Mixing tests: Diagnostic aides in the investigation of prolonged prothrombin times and activated partial thromboplastin times . Seminars in thrombosis and hemostasis, 2013,39(3):283-290.

[3] 吴竞生. 凝血因子ⅷ抑制物的诊治进展[J]. 血栓与止血学,2013,02(19).

[4] 中华医学会血液学分会血栓与止血学组. 血友病诊断与治疗中国专家共识(2013年版) [J]. 中华血液学杂志, 2013,05(34).

[5] Plebani M,Favaloro EJ,Lippi G. Patient safety and quality in laboratory and hemostasis testing: a renewed loop? Semin  Thromb Hemost 2012;38(6):553-558


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